1 药敏试纸的制备
药敏纸片的制备：取杭州富阳特种纸厂生产的直径18cm的定量滤纸，用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片，取100片圆形纸片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎，120℃干燥灭菌2小时备用。
药液的制备：按兽药说明书上标明的治疗量比例配制药液。如规格为100g的抗菌物，包装说明兑水200千克，即用天平称药物1g加50mL的灭菌注射水置于灭菌器皿内，充分溶解后吸出1mL置于另一个灭菌容器中，再加入39mL的灭菌注射水。
药敏纸片的制作：将含有100片纸片的青霉素瓶内加入配置好的药液0.5mL，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密封，切勿受潮，置阴暗干燥处存放备用。
2 细菌的分离培养与鉴定
细菌的分离培养：采用常规法将细菌病料接种于麦康凯培养基上，37℃培养24小时。挑取单个菌落于普通琼脂平板上进行纯培养，37℃培养24小时。挑取单个菌落进行革兰氏染色、镜检，镜下可见大量散在的红色、中等大小、两端钝圆的无芽孢直杆菌，初步确定为大肠杆菌。
生化试验：取待检菌培养物分别接种在蛋白胨水、缓冲蛋白胨水、枸橼酸盐、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素琼脂、三糖铁琼脂、半固体琼脂培养基上，置37℃恒温箱中，培养24小时。结果显示：能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇，产酸。尿素酶试验阴性，不产生H2S，有鞭毛，能运动。符合大肠杆菌的生化特性，证实确为大肠杆菌。
3 药敏试验
将麦康凯培养基上认定的大肠杆菌菌落，无菌环境下用接种环挑出，均匀涂布在营养琼脂培养基上，等距离放置以下药敏纸片：诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、氨苄西林、多粘菌素、头孢曲松、氟苯尼考，置恒温箱中培养24小时，按以下标准判定药物敏感度。
